透射(she)熒光(guang)顯微(wei)鏡與(yu)反(fan)射(she)熒光(guang)顯微(wei)鏡的區別(bie)及優缺(que)點(dian)

1．透射(she)式(shi)熒光(guang)顯微(wei)鏡：激(ji)發(fa)光(guang)源是(shi)通過聚(ju)光(guang)鏡穿(chuan)過標(biao)本材料(liao)來激(ji)發(fa)熒光(guang)的。常(chang)用暗(an)視(shi)野集光(guang)器(qi)，也可用普(pu)通集光(guang)器(qi)，調(tiao)節(jie)反(fan)光(guang)鏡使激(ji)發(fa)光(guang)轉射(she)和旁(pang)射到標本上(shang)．這(zhe)是(shi)比較(jiao)舊式(shi)的熒光(guang)顯微(wei)鏡。其優點(dian)是(shi)低(di)倍(bei)鏡(jing)時(shi)熒光(guang)強，而缺點是(shi)隨(sui)放大(da)倍數增加(jia)其熒光(guang)減(jian)弱(ruo)．所(suo)以(yi)對(dui)觀(guan)察(cha)較(jiao)大的標本材料(liao)較好。

2．落射(she)式(shi)熒光(guang)顯微(wei)鏡：這(zhe)是(shi)近代(dai)發(fa)展起(qi)來(lai)的新(xin)式(shi)熒光(guang)顯微(wei)鏡，與(yu)上(shang)不同(tong)處是(shi)激(ji)發(fa)光(guang)從(cong)物(wu)鏡向(xiang)下落射(she)到(dao)標本表面(mian)，即用同(tong)壹(yi)物(wu)鏡作(zuo)為(wei)照(zhao)明聚(ju)光(guang)器(qi)和(he)收集熒光(guang)的物(wu)鏡。光(guang)路中(zhong)需(xu)加(jia)上(shang)壹(yi)個(ge)雙(shuang)色(se)束(shu)分(fen)離(li)器(qi)，它(ta)與光(guang)鈾呈(cheng)45度(du)角(jiao)，激(ji)發(fa)光(guang)被反(fan)射(she)到(dao)物(wu)鏡中(zhong)，並(bing)聚(ju)集(ji)在(zai)樣品(pin)上(shang)，樣品(pin)所(suo)產(chan)生(sheng)的熒光(guang)以(yi)及由(you)物(wu)鏡透鏡(jing)表面(mian)、蓋玻片表面(mian)反(fan)射(she)的激(ji)發(fa)光(guang)同(tong)時(shi)進入(ru)物(wu)鏡，反(fan)回(hui)到(dao)雙(shuang)色(se)束(shu)分(fen)離(li)器(qi)，使激(ji)發(fa)光(guang)和熒光(guang)分開(kai)，殘余(yu)激(ji)發(fa)光(guang)再被阻(zu)斷濾(lv)片吸(xi)收。如換用不同(tong)的激(ji)發(fa)濾(lv)片／雙(shuang)色(se)束(shu)分(fen)離(li)器(qi)／阻(zu)斷濾(lv)片的組(zu)合插(cha)塊(kuai)，可(ke)滿足不同(tong)熒光(guang)反(fan)應產(chan)物(wu)的需要(yao)。此(ci)種(zhong)熒光(guang)顯微(wei)鏡的優點(dian)是(shi)視(shi)野照(zhao)明均(jun)勻(yun)，成(cheng)像(xiang)清(qing)晰(xi)，放大倍(bei)數愈大(da)熒光(guang)愈強(qiang)。

透射(she)熒光(guang)顯微(wei)鏡的優點(dian)及缺(que)點

光(guang)源：高(gao)壓汞(gong)燈或(huo)鹵素(su)燈(deng)。

聚(ju)光(guang)鏡：使用暗(an)場聚光(guang)鏡，使激(ji)發(fa)光(guang)和熒光(guang)分離(li)出(chu)來(lai)。

物(wu)鏡：可用任(ren)何種(zhong)類(lei)的物(wu)鏡。

標本：因(yin)為(wei)是(shi)透射(she)觀(guan)察(cha)，薄(bo)的標本比較(jiao)適合。

優點(dian)：①由(you)於(yu)用了(le)暗場聚光(guang)鏡，激(ji)發(fa)光(guang)不能進入(ru)物(wu)鏡，因(yin)此(ci)容(rong)易形成(cheng)暗(an)的背景，得到良(liang)好的反(fan)差(cha)，且任(ren)何物(wu)鏡都可(ke)用於(yu)觀(guan)察(cha)。②用低(di)倍(bei)物(wu)鏡時(shi)，比反(fan)射(she)熒光(guang)顯微(wei)鏡更(geng)亮。

缺點：必(bi)須正(zheng)確(que)調(tiao)整聚光(guang)鏡中(zhong)心(xin)和(he)高(gao)度(du)，否則(ze)不能獲得明亮(liang)的熒光(guang)像(xiang)。由(you)於(yu)暗視(shi)場聚光(guang)鏡焦(jiao)距限(xian)制(zhi)，不能使用厚的載玻片。視(shi)場照(zhao)明區(qu)不能過大(da)，否則(ze)容易使熒光(guang)標本熒光(guang)色(se)衰(shuai)褪。厚的或(huo)不透明的標本不適用。

反(fan)射(she)熒光(guang)顯微(wei)鏡的優點(dian)及缺(que)點
光(guang)源：高(gao)壓汞(gong)燈或(huo)鹵素(su)燈(deng)。

聚(ju)光(guang)鏡：因(yin)為(wei)物(wu)鏡作(zuo)為(wei)聚(ju)光(guang)鏡，所(suo)以(yi)不需要聚光(guang)鏡。

物(wu)鏡：所(suo)用物(wu)鏡必(bi)須能(neng)透(tou)過足(zu)夠(gou)的紫(zi)外光(guang)，而且本身不產(chan)生(sheng)熒光(guang)，對數值孔(kong)徑沒有(you)限(xian)制(zhi)。

標(biao)本：厚的標本或(huo)不透明的標本都能(neng)觀(guan)察(cha)。

優點(dian)：①由(you)於(yu)物(wu)鏡兼(jian)作(zuo)聚光(guang)鏡，不需要很多調(tiao)節(jie)。②采(cai)用柯(ke)拉照(zhao)明法(fa)，可(ke)利(li)用孔(kong)徑光(guang)闌和(he)視(shi)場光(guang)闌的效(xiao)果。③物(wu)鏡數值孔(kong)徑不受(shou)限(xian)制(zhi)，在(zai)高放大倍(bei)率時(shi)，也可以(yi)獲(huo)得高分(fen)辨率的像(xiang)。④厚的或(huo)不透明的標本也能觀(guan)察(cha)，厚的蓋玻片也能使用。⑤其它(ta)觀(guan)察(cha)法(fa)也能與反(fan)射(she)熒光(guang)結合(he)使用，特(te)別和相(xiang)差(cha)法(fa)和(he)透(tou)射(she)微分幹(gan)涉(she)差(cha)法(fa)相(xiang)結(jie)合(he)。⑥可以(yi)避(bi)免不必(bi)要的熒光(guang)色(se)衰(shuai)褪現(xian)象(xiang)。

缺點(dian)：在(zai)用地(di)倍率物(wu)鏡時(shi)，像(xiang)比(bi)較(jiao)暗，因(yin)此(ci)必(bi)須用大(da)數值孔(kong)徑的物(wu)鏡。濾(lv)光(guang)鏡系(xi)統必(bi)須有(you)效(xiao)地分(fen)離(li)開(kai)激(ji)發(fa)光(guang)和熒光(guang)。