熒光(guang)顯微(wei)鏡(jing)是利(li)用壹(yi)個高(gao)發光(guang)效率(lv)的點光(guang)源,經(jing)過濾(lv)色(se)系(xi)統(tong)發出(chu)壹定(ding)波長的光(guang)(如紫(zi)外光(guang)3650入或(huo)紫(zi)藍(lan)光(guang)4200入)作(zuo)為激(ji)發(fa)光(guang)、激發(fa)標本內的熒光(guang)物質(zhi)發射(she)出(chu)各種不(bu)同(tong)顏(yan)色的熒光(guang)後,再(zai)通過物(wu)鏡(jing)和目鏡(jing)的放(fang)大進(jin)行觀察。這樣在(zai)強烈(lie)的對襯(chen)背(bei)景下,即使(shi)熒光(guang)很(hen)微弱(ruo)也易(yi)辨(bian)認(ren),敏(min)感(gan)性高(gao),主(zhu)要(yao)用(yong)於(yu)細(xi)胞結構和功(gong)能以及化(hua)學(xue)成分(fen)等(deng)的研究。
熒光(guang)顯微(wei)鏡(jing)的基本構造(zao)是由普(pu)通光(guang)學顯(xian)微鏡(jing)加上壹些附(fu)件(jian)(如熒(ying)光(guang)光(guang)源、激(ji)發濾(lv)片、雙色(se)束(shu)分(fen)離器和阻(zu)斷濾片等(deng))的基礎(chu)上組成(cheng)的。熒光(guang)光(guang)源——般(ban)采(cai)用超(chao)高(gao)壓(ya)汞燈(50壹(yi)200W),它(ta)可(ke)發出(chu)各種波長的光(guang),但每(mei)種熒(ying)光(guang)物質(zhi)都有(you)壹(yi)個產生*強熒(ying)光(guang)的激發(fa)光(guang)波長,所以需(xu)加用(yong)激發濾片(壹(yi)般有(you)紫(zi)外、紫色(se)、藍(lan)色(se)和綠(lv)色(se)激發(fa)濾片),僅(jin)使(shi)壹定(ding)波長的激發(fa)光(guang)透過照(zhao)射(she)到(dao)標本上,而將其(qi)他光(guang)都吸(xi)收(shou)掉(diao)。每種物質(zhi)被(bei)激(ji)發光(guang)照射(she)後,在(zai)極(ji)短(duan)時間(jian)內發(fa)射(she)出(chu)較(jiao)照(zhao)射波長更(geng)長的可(ke)見熒(ying)光(guang)。熒光(guang)具有(you)專壹(yi)性,壹(yi)般(ban)都(dou)比激(ji)發(fa)光(guang)弱(ruo),為能觀察到(dao)專壹(yi)的熒光(guang),在(zai)物(wu)鏡(jing)後面(mian)需(xu)加阻(zu)斷(或(huo)壓(ya)制(zhi))濾光(guang)片。
熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡(jing)使(shi)用註(zhu)意事(shi)項(xiang):
1、嚴(yan)格按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)進(jin)行操(cao)作(zuo),不(bu)要(yao)隨意(yi)改變(bian)程序。
2、應(ying)在(zai)暗(an)室中(zhong)進(jin)行檢(jian)查。進(jin)入(ru)暗室後(hou),接上電源(yuan),點(dian)燃(ran)超高(gao)壓(ya)汞燈5~15min,待(dai)光(guang)源發(fa)出(chu)強光(guang)穩(wen)定(ding)後(hou),眼睛(jing)*適應暗室,再(zai)開(kai)始觀察標本。
3、防止(zhi)紫外線對眼睛(jing)的損(sun)害,在(zai)調(tiao)整光(guang)源時(shi)應戴(dai)上防護(hu)眼鏡(jing)。
4、檢(jian)查時(shi)間(jian)每次(ci)以1~2h為宜(yi),超過90min,超(chao)高(gao)壓(ya)汞燈發(fa)光(guang)強度(du)逐(zhu)漸下降(jiang),熒(ying)光(guang)減(jian)弱(ruo);標本受紫(zi)外線照射3~5min後(hou),熒(ying)光(guang)也明(ming)顯(xian)減(jian)弱(ruo);所以,Z多(duo)不(bu)得(de)超(chao)過2~3h。
5、光(guang)源壽(shou)命有(you)限(xian),標本應集(ji)中檢(jian)查,以節省(sheng)時(shi)間(jian),保護(hu)光(guang)源。天(tian)熱時(shi),應加電扇(shan)散(san)熱降(jiang)溫,新(xin)換(huan)燈(deng)泡應從(cong)開始(shi)就(jiu)記錄(lu)使(shi)用時(shi)間(jian)。燈熄(xi)滅(mie)後(hou)欲再用(yong)時,須(xu)待(dai)燈泡(pao)充分(fen)冷卻(que)後(hou)才能點燃(ran)。壹天中(zhong)應(ying)避免數次點(dian)燃(ran)光(guang)源。
6、標本染(ran)色(se)後立即觀察,因(yin)時間(jian)久了(le)熒(ying)光(guang)會逐(zhu)漸減(jian)弱(ruo)。若(ruo)將標本放(fang)在(zai)聚乙烯塑料(liao)袋中保(bao)存(cun),可(ke)延緩(huan)熒(ying)光(guang)減(jian)弱(ruo)時(shi)間(jian),防止(zhi)封裱劑蒸(zheng)發(fa)。
7、熒(ying)光(guang)亮度(du)的判斷標準:壹般分(fen)為四(si)級,即“-”表示(shi)無(wu)或(huo)可(ke)見微(wei)弱(ruo)熒(ying)光(guang)。“+”表示(shi)僅(jin)能見明(ming)確(que)可(ke)見的熒光(guang)。“++”表示(shi)可(ke)見有(you)明(ming)亮的熒光(guang)。“+++”表示(shi)可(ke)見耀(yao)眼的熒光(guang)。