普(pu)通(tong)PCR 梯(ti)度(du)PCR 熒光(guang)定量(liang)PCR儀的(de)區別及運用(yong)

PCR：即(ji)合(he)酶(mei)鏈式(shi)反(fan)應(ying)(Polymerase Chain Reaction)，利(li)用(yong)DNA在(zai)體(ti)外(wai)95℃時(shi)解旋(xuan)（變性），55℃時(shi)引(yin)物與(yu)單(dan)鏈按(an)堿(jian)基互(hu)補配對的(de)原則(ze)結(jie)合(he)（退火），再(zai)調(tiao)溫(wen)度(du)至72℃左(zuo)右，DNA聚(ju)合(he)酶(mei)沿(yan)著磷酸到(dao)五碳(tan)糖(5'-3')的(de)方(fang)向(xiang)合(he)成互(hu)補鏈(lian)（延(yan)伸）。

PCR儀實際(ji)就是(shi)壹(yi)個溫控(kong)設(she)備，能(neng)在(zai)95℃，55℃，72℃之(zhi)間很(hen)好地(di)進行(xing)溫(wen)度控(kong)制(zhi)。

根據(ju)DNA擴(kuo)增(zeng)的(de)目的(de)和檢測(ce)的(de)標(biao)準(zhun)可以(yi)將PCR儀分(fen)為(wei)：普(pu)通(tong)PCR儀，梯(ti)度(du)PCR儀，原(yuan)位PCR，實時(shi)熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀等(deng)幾類

普(pu)通(tong)PCR儀：

壹(yi)般(ban)把(ba)壹次(ci)PCR擴(kuo)增(zeng)只(zhi)能(neng)運(yun)行(xing)壹個特定退火溫(wen)度的(de)PCR儀，稱之(zhi)為(wei)普(pu)通(tong)PCR儀，也就是(shi)傳(chuan)統(tong)的(de)PCR儀。如果要用它(ta)做(zuo)不(bu)同的(de)退火溫(wen)度則(ze)需要(yao)多(duo)次運(yun)行。

   普(pu)通(tong)PCR儀主(zhu)要(yao)應(ying)用(yong)於科研、教(jiao)學、臨床(chuang)醫(yi)學、檢驗、檢疫(yi)等(deng)。

如:啟(qi)步(bu)BSW-2P,BSW-3P,BSW-6P-I/II ,ABI 2720型(xing)

更(geng)多詳(xiang)情(qing): 上(shang)海啟(qi)步(bu)生(sheng)物科技(ji)有(you)限(xian)公司(si)

梯(ti)度(du)PCR儀：

壹(yi)次性(xing)PCR擴(kuo)增(zeng)可以(yi)設(she)置(zhi)壹(yi)系(xi)列(lie)不(bu)同的(de)退火溫(wen)度條件(jian)（通(tong)常(chang)12種(zhong)溫度(du)梯(ti)度(du)）的(de)稱之(zhi)為(wei)梯(ti)度(du)PCR儀。不(bu)同的(de)DNA片(pian)段其的(de)退火溫(wen)度不(bu)同，通(tong)過設(she)置(zhi)壹(yi)系(xi)列(lie)的(de)梯(ti)度(du)退火溫(wen)度進行(xing)擴(kuo)增(zeng)，從而壹次(ci)性PCR擴(kuo)增(zeng)就可以(yi)篩選出表達(da)量高(gao)的(de)退火溫(wen)度進行(xing)有(you)效的(de)擴增(zeng)。

    梯(ti)度(du)PCR儀主(zhu)要(yao)用於研究(jiu)未(wei)知DNA退火溫(wen)度的(de)擴增(zeng)，這樣(yang)既(ji)節(jie)約時間，也節(jie)約成本(ben)。在(zai)不(bu)設(she)置(zhi)梯(ti)度(du)的(de)情況(kuang)下亦(yi)可當(dang)做(zuo)普(pu)通(tong)的(de)PCR用(yong)。梯(ti)度(du)PCR儀多(duo)應(ying)用(yong)於科研、教(jiao)學機構,檢驗、檢疫(yi)等(deng)。

如:啟(qi)步(bu)BSW-2T,BSW-3T,BSW-6T-I/II ,ABI 9700,ABI Veriti, Bio-Rad T100 PCR儀

更(geng)多詳(xiang)情(qing): 上(shang)海啟(qi)步(bu)生(sheng)物科技(ji)有(you)限(xian)公司(si)

原(yuan)位PCR儀：

PCR是(shi)提(ti)取細(xi)胞或(huo)組織(zhi)中(zhong)的(de)DNA進行(xing)基(ji)因擴(kuo)增(zeng)反(fan)應(ying)，而原位(wei)PCR是(shi)保(bao)持(chi)細(xi)胞或(huo)組織(zhi)的(de)完(wan)整性(xing)，使PCR反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)滲(shen)透(tou)到(dao)組織(zhi)和細(xi)胞中(zhong)，在(zai)細(xi)胞的(de)靶DNA所(suo)在的(de)位置(zhi)上(shang)進行(xing)基(ji)因擴(kuo)增(zeng)。不(bu)但(dan)可以(yi)檢測(ce)到(dao)靶DNA，而且還可以(yi)了解(jie)靶DNA存(cun)在於(yu)何(he)種細(xi)胞中(zhong)，更(geng)有(you)利(li)於(yu)探(tan)討(tao)靶DNA與(yu)細(xi)胞之(zhi)間的(de)關系(xi)。

    原(yuan)位PCR儀,主(zhu)要(yao)應(ying)用(yong)於：（1）檢測(ce)外(wai)源性(xing)基因片(pian)段，提(ti)高(gao)檢出率，集中(zhong)在(zai)病毒(du)感染的(de)檢查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等(deng)；（2）觀察病原(yuan)體(ti)在(zai)體(ti)內(nei)分布規律(lv)（3）內(nei)源性(xing)基因(yin)片(pian)段，如人(ren)體(ti)的(de)單(dan)基因(yin)病、重(zhong)組基因、易位的(de)染色體(ti)、Ig的(de)mRNA片(pian)段、癌(ai)基因(yin)片(pian)段等(deng)。（4）檢測(ce)導入(ru)基(ji)因(yin)；（5） 遺(yi)傳病基(ji)因檢測(ce)如β－地(di)中(zhong)海(hai)貧(pin)血。 

實時(shi)熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀：

在(zai)普(pu)通(tong)PCR儀設(she)計(ji)基(ji)礎(chu)上增(zeng)加熒(ying)光(guang)信(xin)號(hao)采(cai)集(ji)系(xi)統(tong)和計算機分(fen)析(xi)處(chu)理系(xi)統(tong)，形成了具有(you)熒光(guang)定量(liang)功能的(de)PCR儀器(qi)。其PCR擴(kuo)增(zeng)原理和普(pu)通(tong)PCR擴(kuo)增(zeng)原理相同，在PCR擴(kuo)增(zeng)時加(jia)入(ru)的(de)引(yin)物是(shi)利(li)用(yong)同位素(su)、熒光(guang)素(su)等(deng)進行(xing)標(biao)記(ji)，使用(yong)引(yin)物和(he)熒(ying)光(guang)探(tan)針(zhen)同時與(yu)模(mo)板(ban)特異性結(jie)合(he)擴增(zeng)。擴增(zeng)的(de)結(jie)果(guo)通(tong)過熒光(guang)信(xin)號(hao)采(cai)集(ji)系(xi)統(tong)實時(shi)采(cai)集信號(hao)連接(jie)輸送(song)到(dao)計算機分(fen)析(xi)處(chu)理系(xi)統(tong)，得出量化(hua)的(de)實時(shi)結(jie)果(guo)輸出。

   熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀有(you)單(dan)通(tong)道，雙(shuang)通(tong)道和(he)多通(tong)道之(zhi)分(fen)。當只(zhi)用(yong)壹(yi)種(zhong)熒光(guang)探(tan)針(zhen)標(biao)記(ji)的(de)時候(hou)，選用(yong)單(dan)通(tong)道；有(you)多種熒(ying)光(guang)標(biao)記(ji)的(de)時候(hou)使用(yong)多通(tong)道。單(dan)通(tong)道也可以(yi)檢測(ce)多(duo)熒光(guang)的(de)標(biao)記(ji)和目的(de)基因(yin)表達(da)產物，因(yin)為(wei)壹(yi)次只(zhi)能(neng)檢測(ce)壹(yi)種目的(de)基因(yin)的(de)擴增(zeng)量，需多(duo)次(ci)擴增(zeng)才能(neng)檢測(ce)完(wan)不同的(de)目的(de)基因(yin)片(pian)段的(de)量。多(duo)通(tong)道利(li)於(yu)做(zuo)多(duo)重PCR，實現壹(yi)次(ci)檢測(ce)多(duo)種目的(de)基因(yin)的(de)功能。

   熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀主(zhu)要(yao)應(ying)用(yong)於臨床(chuang)醫(yi)學檢測(ce)、生(sheng)物醫(yi)藥研發(fa)、食(shi)品行(xing)業(ye)、科研院(yuan)校(xiao)等(deng)。熒(ying)光(guang)定量(liang)檢測(ce)技(ji)術(shu)在(zai)臨床(chuang)診斷(duan)方(fang)面(mian)很多(duo)，主(zhu)要(yao)集中(zhong)在(zai)各(ge)種(zhong)病原(yuan)體(ti)引(yin)起(qi)疾病的(de)臨床(chuang)診斷(duan)，如肝(gan)炎(yan)類疾病、性(xing)病、與(yu)優生(sheng)優育(yu)相(xiang)關的(de)疾病以(yi)及肺結(jie)核(he)等(deng)等(deng)。

文(wen)章來(lai)源來(lai)：啟(qi)步(bu)生(sheng)物