什麽是(shi)進(jin)口(kou)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)的基本(ben)原理

　　進(jin)口(kou)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)是(shi)以(yi)紫(zi)外線(xian)為(wei)光(guang)源，用(yong)以(yi)照(zhao)射被檢物(wu)體，使之發出熒(ying)光，然後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)物(wu)體的形狀(zhuang)及其所在(zai)位置(zhi)。其主(zhu)要(yao)用(yong)於研(yan)究細胞內物質的吸收、運(yun)輸、化學(xue)物質(zhi)的分布(bu)及定位等。細胞中有(you)些(xie)物(wu)質(zhi)，如葉(ye)綠素(su)等，受紫(zi)外(wai)線(xian)照(zhao)射後可發熒(ying)光;另(ling)有(you)壹(yi)些(xie)物(wu)質(zhi)本(ben)身(shen)雖不(bu)能發(fa)熒(ying)光，但如果用(yong)熒(ying)光染料或熒(ying)光抗(kang)體染色後，經紫(zi)外(wai)線(xian)照(zhao)射亦可發(fa)熒(ying)光，進(jin)口(kou)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)就(jiu)是(shi)對這類物(wu)質(zhi)進(jin)行(xing)定(ding)性(xing)和(he)定量研(yan)究的工具之壹。
 

　　進(jin)口(kou)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)的基本(ben)原理：
 

　　熒(ying)光：是(shi)壹(yi)種(zhong)非溫(wen)度(du)輻(fu)射冷光，據發生(sheng)性(xing)質(zhi)可分為(wei)光(guang)化熒(ying)光(由特定光源(yuan)光(guang)譜激(ji)發(fa)而產(chan)生(sheng)的熒(ying)光)、放(fang)射熒(ying)光(放(fang)射性物質(zhi)激發(fa))、生(sheng)物(wu)熒(ying)光(生(sheng)物(wu)體發出)、化學熒(ying)光(如磷(lin)氧化時(shi))等。
 

　　熒(ying)光現(xian)象(xiang)：某物(wu)質(zhi)在(zai)受到某種(zhong)特(te)定波(bo)長的高能量光(短(duan)波(bo)長)照(zhao)射後獲取能量，幾乎(hu)即時(shi)(約在(zai)10～15s後)其分子(zi)內的電子(zi)躍遷(qian)到較(jiao)高能級(ji)軌(gui)道(dao)使(shi)分子(zi)進(jin)入激(ji)發(fa)態(tai)，激(ji)發(fa)態(tai)的分子(zi)不(bu)通過內部轉(zhuan)換(huan)方式消(xiao)耗能量回(hui)到基態(tai)，而(er)是(shi)釋放出相應(ying)較(jiao)低能量的光量子(zi)→人(ren)眼(yan)可見的熒(ying)光(較(jiao)長波(bo)長)。
 

　　熒(ying)光現(xian)象(xiang)有(you)兩(liang)種：壹(yi)次熒(ying)光現(xian)象(xiang)，又稱“固有(you)熒(ying)光”或(huo)“自(zi)發(fa)熒(ying)光”，是(shi)指(zhi)經照(zhao)射後，就能發(fa)出熒(ying)光的物質，此(ci)類物質的化學特(te)征(zheng)是(shi)發光(guang)分子(zi)具有(you)共(gong)軛雙(shuang)鍵，π電(dian)子(zi)活動(dong)性大。二(er)次熒(ying)光現(xian)象(xiang)，又稱“繼發(fa)熒(ying)光”，物(wu)質(zhi)經照(zhao)射後不(bu)能或(huo)只(zhi)能部(bu)分發(fa)生(sheng)微(wei)弱(ruo)的熒(ying)光，這樣(yang)就(jiu)需(xu)先用(yong)熒(ying)光色素(su)(或稱熒(ying)光染料、熒(ying)光探(tan)針)標記(ji)處(chu)理，將(jiang)熒(ying)光色素(su)標記(ji)結(jie)合插(cha)入到不(bu)發光(guang)的活性分子(zi)中去，再經照(zhao)射才能發(fa)生(sheng)熒(ying)光。熒(ying)光色素(su)應(ying)具備的基本(ben)條(tiao)件是(shi)能與不(bu)發光(guang)分子(zi)的某個(ge)區(qu)域有(you)特(te)異性(xing)的牢(lao)固結(jie)合，同(tong)時(shi)不(bu)會(hui)影(ying)響被結(jie)合分子(zi)的結(jie)構(gou)和特(te)性，光(guang)量子(zi)效率(lv)應(ying)≥013。
 

　　熒(ying)光的產生(sheng)包(bao)含了(le)激(ji)發(fa)(Excitation)和發(fa)射(Emission)兩(liang)個(ge)過程，激發光譜短(duan)於發(fa)射光譜，故(gu)光(guang)色不(bu)同(tong)。而(er)不(bu)同(tong)的熒(ying)光物(wu)質(zhi)或(huo)熒(ying)光色素(su)有(you)其(qi)最(zui)敏感(gan)而(er)有(you)效(xiao)的激發波(bo)長，因(yin)此(ci)選擇(ze)合適(shi)的激發/發(fa)射光譜以(yi)獲(huo)得(de)最(zui)佳(jia)的熒(ying)光鏡(jing)像(xiang)質(zhi)量是實(shi)驗中要(yao)首(shou)先考(kao)慮(lv)的。
 

　　熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)是(shi)利用(yong)“光(guang)化(hua)熒(ying)光”成(cheng)像(xiang)，如果所(suo)選(xuan)激發波(bo)長在(zai)肉(rou)眼(yan)所看不(bu)見的近(jin)紫(zi)外(wai)光(guang)區(qu)(320～400nm)，熒(ying)光的發射光譜也(ye)較(jiao)普通光(guang)鏡(jing)光(guang)源(yuan)的平均(jun)波(bo)長短(duan)，光(guang)學分辨(bian)率(lv)提(ti)高(gao)。