熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)選購的四個要點(dian)

　　1、運(yun)行速度
　　
　　在(zai)熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)的眾(zhong)多(duo)技(ji)術(shu)參數中(zhong)，升(sheng)降(jiang)溫(wen)速度也是(shi)廠(chang)家喜歡大(da)力(li)宣(xuan)傳的指標(biao)。更快(kuai)的升(sheng)降(jiang)溫(wen)，可以(yi)縮短(duan)反應(ying)進(jin)行(xing)的時(shi)間，而且(qie)縮短(duan)了可能的非(fei)特異(yi)性(xing)結(jie)合(he)、反應(ying)的時(shi)間，提(ti)高PCR的特(te)異(yi)性(xing)。為(wei)了更好的完(wan)成實驗，各(ge)個廠家紛(fen)紛(fen)推(tui)出能(neng)快(kuai)速運(yun)行的熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)。例如(ru)ROCHE推(tui)出(chu)的Lightcycler2.0利(li)用(yong)空氣(qi)動(dong)力(li)學(xue)原(yuan)理(li)，可(ke)在(zai)半小(xiao)時左(zuo)右(you)完(wan)成(cheng)30-40個循(xun)環。ABI的7500可(ke)以選(xuan)配FAST模(mo)塊擁有5°C/秒的升(sheng)降(jiang)溫(wen)速度，可在(zai)40分鐘左(zuo)右(you)完(wan)成(cheng)30-40個循(xun)環。zui近eppendorf新推出(chu)的Mastercyclereprealplex4S和(he)2S的銀質(zhi)模(mo)塊熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)，升(sheng)降(jiang)溫(wen)的速度可達(da)到6℃/秒和4.5/秒，是(shi)目(mu)前(qian)同類(lei)產(chan)品中(zhong)升(sheng)降(jiang)溫(wen)速度zui快(kuai)的熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)。壹(yi)個在(zai)其他(ta)儀(yi)器(qi)上原(yuan)本(ben)需(xu)要40—60分鐘的PCR反應(ying)，eppendorfMastercyclereprealplex4S和(he)2S(銀質(zhi)模(mo)塊)只需(xu)運(yun)行28分鐘——別小(xiao)看這(zhe)節(jie)約下(xia)來的幾(ji)十分(fen)鐘，壹(yi)天下來就(jiu)可(ke)以多(duo)運(yun)行好幾(ji)輪了。
　　
　　2、靈(ling)活(huo)性(xing)
　　
　　大(da)規(gui)模(mo)繁忙(mang)的實驗室(shi)設備(bei)固然(ran)讓人(ren)羨慕，但是(shi)常(chang)規(gui)實驗室(shi)同樣(yang)可(ke)以(yi)有精彩的選(xuan)擇(ze)。現(xian)在(zai)的儀(yi)器供應(ying)商(shang)擁有眾(zhong)多(duo)技(ji)術(shu)專(zhuan)家，有的還(hai)能提(ti)供整個分子(zi)生(sheng)物學(xue)的基(ji)礎(chu)研究平臺，不但了解、滿(man)足您現(xian)在(zai)的需(xu)求，而且(qie)還考(kao)慮(lv)到(dao)了妳可能(neng)變(bian)化的需(xu)求——升(sheng)級(ji)和更換模(mo)塊。Bio-rad的Mycycler就(jiu)可(ke)以選擇(ze)模(mo)塊升(sheng)級(ji)為(wei)定(ding)量PCR儀(yi)。ABI的7900可(ke)以選(xuan)擇(ze)將(jiang)96孔槽(cao)變(bian)為(wei)384孔槽(cao)。像離心(xin)式(shi)的雙(shuang)通道(dao)的Rotor-gene3000A
　　
　　就(jiu)可(ke)以根據(ju)您研究的需(xu)要升(sheng)級(ji)成四通道(dao)的熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)。Eppendorf公司在(zai)這方(fang)面考(kao)慮(lv)的就(jiu)更加周(zhou)全，如(ru)實驗室(shi)已(yi)經擁有Mastercyclerep可以(yi)按(an)照(zhao)您的要求升(sheng)級(ji)為(wei)Mastercyclereprealplex熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)，而且(qie)可升(sheng)級(ji)的型號有4種：2通(tong)道(dao)銀質(zhi)、鋁(lv)制(zhi)模(mo)塊和4通(tong)道(dao)銀質(zhi)、鋁(lv)制(zhi)模(mo)塊。您可(ke)以根據(ju)自(zi)己的經(jing)費和實驗需(xu)要購買(mai)、升(sheng)級(ji)任(ren)何(he)壹(yi)款Mastercyclereprealplex熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)。
　　
　　3、儀器的檢(jian)測通(tong)量
　　
　　在(zai)購買定(ding)量PCR儀(yi)的時(shi)候(hou)要根據(ju)實驗實的需(xu)要來選擇(ze)不同通(tong)量的儀(yi)器。目(mu)前市(shi)面(mian)上(shang)的熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR的檢(jian)測通(tong)量小(xiao)到16個多(duo)到(dao)384個。如(ru)果(guo)進(jin)行(xing)壹(yi)般的基(ji)因表(biao)達研究或(huo)病原(yuan)體檢(jian)測，實在(zai)不必購(gou)買昂(ang)貴(gui)的儀(yi)器，96孔(kong)的通(tong)量足(zu)夠用(yong)；需(xu)要尋找要新藥(yao)靶點(dian)和疾病標記的實驗室(shi)可以(yi)考(kao)慮(lv)購(gou)買384孔板的儀(yi)器。假(jia)如(ru)經(jing)費有限無(wu)法(fa)購買384孔板(ban)儀(yi)器(qi)的實驗室(shi)，可以(yi)考(kao)慮(lv)購(gou)買運(yun)行速度快(kuai)（帶有FAST模(mo)塊）的96孔(kong)板熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)。
　　
　　4、硬(ying)件(jian)設(she)計(ji)特(te)點(dian)
　　
　　熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)主(zhu)要有傳統(tong)的96孔(kong)板式(shi)、創新(xin)的離(li)心式(shi)等，每(mei)種設(she)計(ji)都有它的獨(du)到之(zhi)處(chu)但也都(dou)有無(wu)法(fa)避(bi)免的缺(que)憾(han)。
　　
　　傳統(tong)的96孔(kong)板的熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR可(ke)以容(rong)納(na)的樣(yang)本(ben)量大(da)，而且(qie)無(wu)需(xu)特殊的耗(hao)材。有些傳(chuan)統(tong)的96孔(kong)板的儀(yi)器采(cai)用(yong)鹵鎢(wu)燈(deng)激(ji)發(fa)、CCD檢(jian)測，這(zhe)些光(guang)學(xue)結(jie)構在(zai)96孔板的頂部，每(mei)個樣(yang)品(pin)孔(kong)距(ju)光(guang)源(yuan)和(he)檢(jian)測器(qi)的光(guang)程(cheng)各(ge)不相(xiang)同——邊(bian)緣效應(ying)，對(dui)結果產(chan)生(sheng)影(ying)響。為(wei)了保證、準確的實驗結(jie)果，這(zhe)類(lei)儀(yi)器(qi)在(zai)實驗過(guo)程中(zhong)通(tong)常(chang)會使用(yong)ROX（壹(yi)種熒(ying)光(guang)染(ran)料(liao)）或的Referencedye作(zuo)為(wei)參照(zhao)校正實驗結(jie)果。鹵鎢(wu)燈(deng)的使(shi)用(yong)壽命短(duan)、更換成(cheng)本(ben)較(jiao)高已(yi)經成為(wei)很多(duo)用(yong)戶(hu)頭(tou)痛(tong)的問(wen)題。在(zai)實驗過(guo)程中(zhong)鹵鎢(wu)燈(deng)作(zuo)為(wei)壹(yi)種熱光(guang)源(yuan)，產(chan)生(sheng)較(jiao)多(duo)熱能對(dui)實驗結(jie)果有壹(yi)定(ding)的影(ying)響。CCDzui大(da)的優點(dian)就(jiu)是(shi)可(ke)以(yi)同時(shi)掃(sao)描(miao)所有樣(yang)品(pin)中(zhong)的熒(ying)光(guang)信號，但是(shi)靈(ling)敏度(du)較(jiao)低，而且(qie)同時(shi)檢(jian)測樣(yang)品(pin)間(jian)的熒(ying)光(guang)信號存在(zai)幹擾(rao)。像ABI、Bio-rad公司(si)生(sheng)產(chan)的熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR就(jiu)屬於(yu)這(zhe)壹(yi)種。但Bio-rad的IQ系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR帶(dai)有梯度(du)功(gong)能。
　　
　　創新(xin)的離(li)心式(shi)的儀(yi)器通(tong)常選(xuan)用(yong)LED激(ji)發(fa)、PMT檢(jian)測，離(li)心(xin)式(shi)的設(she)計上(shang)避(bi)免了邊緣效應(ying)。LED光(guang)源(yuan)是(shi)冷(leng)光(guang)源(yuan)對(dui)實驗沒(mei)有影(ying)響，因(yin)此(ci)無(wu)需(xu)采用(yong)其他(ta)熒(ying)光(guang)染(ran)料(liao)校正儀器(qi)，而且(qie)使用(yong)壽命長(chang)無(wu)需(xu)經常(chang)更換。PMT每(mei)次(ci)只能收(shou)集單(dan)個熒(ying)光(guang)信號，但是(shi)檢(jian)測靈(ling)敏度(du)高。但這類(lei)儀器(qi)運(yun)行速度非常(chang)快(kuai)，但也存(cun)在(zai)樣(yang)本(ben)量小(xiao)、耗(hao)材昂(ang)貴(gui)、沒(mei)有梯度(du)功(gong)能、存在(zai)時間積分等缺(que)點(dian)。Corbett的Rotor-gene系(xi)列(lie)和(he)Roche的Lightcycler系(xi)列(lie)均(jun)為(wei)這壹(yi)類儀(yi)器(qi)。
　　
　　隨(sui)著(zhe)熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR技(ji)術(shu)的使(shi)用(yong)，聰(cong)明的儀(yi)器生(sheng)產(chan)商紛(fen)紛(fen)在(zai)傳統(tong)的96孔(kong)板儀(yi)器上(shang)大(da)作(zuo)改(gai)進(jin)。首(shou)先(xian)是(shi)Stratagene的Mx3000p在(zai)檢(jian)測上(shang)突破(po)了使用(yong)CCD改(gai)用(yong)PMT檢(jian)測熒(ying)光(guang)信號，大(da)大(da)提(ti)高(gao)了實驗的靈(ling)敏度(du)，但激發(fa)光(guang)源(yuan)仍然(ran)沿用(yong)傳(chuan)統(tong)的鹵鎢(wu)燈(deng)並(bing)且(qie)沒有梯度(du)功(gong)能。Eppendorf公司推出(chu)的Mastercyclereprealplex是(shi)壹(yi)款帶(dai)有梯度(du)功(gong)能的熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)，使用(yong)了96個LED為(wei)激發(fa)光(guang)源(yuan)，采(cai)用(yong)先(xian)進(jin)的CPM（第二(er)代(dai)PMT）及96合(he)壹(yi)光(guang)纖為(wei)檢(jian)測系(xi)統(tong)，不但避(bi)免了邊緣效應(ying)還(hai)保證所有樣(yang)品(pin)間(jian)的熒(ying)光(guang)信號沒有幹擾(rao)。