溫度梯(ti)度PCR儀和(he)降(jiang)落PCR區別大(da)嗎

　　
　　
　　溫度梯(ti)度PCR是(shi)指在退(tui)火溫度不太明(ming)確(que)時(shi)，為(wei)了(le)找到*退(tui)火溫度，在壹(yi)臺PCR儀上(shang)同(tong)時(shi)做多管PCR，每(mei)壹(yi)管放(fang)在儀器內不(bu)同(tong)列(lie)（有的是(shi)不同(tong)行）上，分別進行PCR（如50℃~60℃可以分6管，分(fen)別為(wei)50，52，54，56，58，60度），zui後(hou)看看哪個(ge)溫度的效(xiao)果。總之(zhi)是(shi)用(yong)來進行退(tui)火溫度優(you)化(hua)的。
　　
　　降(jiang)落PCR是(shi)在同壹(yi)個PCR管內進行PCR，只是(shi)每個(ge)循(xun)環的(de)溫度不同(tong)（如每(mei)個(ge)循(xun)環降(jiang)1度）。壹(yi)般兼並(bing)引(yin)物(wu)用(yong)這種(zhong)方法(fa)多(duo)些。
　　
　　設計(ji)多(duo)循(xun)環反(fan)應(ying)的程序，以使(shi)相連(lian)循(xun)環的(de)退(tui)火溫度越來越低。由(you)於(yu)開(kai)始(shi)時(shi)的(de)退(tui)火溫度選(xuan)擇(ze)為(wei)高(gao)於(yu)估(gu)計(ji)的(de)Tm值，隨(sui)著循(xun)環的(de)進行，退(tui)火溫度逐(zhu)漸(jian)降到(dao)Tm值，並(bing)zui終(zhong)低(di)於(yu)這(zhe)個(ge)水平(ping)，用(yong)於(yu)確(que)保*個(ge)引(yin)物(wu)—模板(ban)雜(za)交(jiao)事(shi)件(jian)發生(sheng)在zui互補的反(fan)應(ying)物(wu)之間，即那些產生目的擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)的反(fan)應(ying)物(wu)之間。盡(jin)管退(tui)火溫度zui終會(hui)降到(dao)非(fei)特(te)異雜(za)交(jiao)的Tm值，但此(ci)時(shi)目(mu)的(de)擴(kuo)增產物(wu)已(yi)開(kai)始(shi)幾(ji)何(he)擴增(zeng)，在剩(sheng)下(xia)的循(xun)環中(zhong)處於(yu)*滯(zhi)後(hou)（非(fei)特(te)異）PCR產(chan)物(wu)的地(di)位。由於(yu)目(mu)標(biao)是(shi)在較早的循(xun)環中(zhong)避(bi)免低(di)Tm值配(pei)對，在TD—PCR中應(ying)用(yong)熱(re)啟(qi)動技(ji)術(shu)。設計(ji)時(shi)，退(tui)火溫度的範圍應跨越15℃左右(you)，從(cong)高於(yu)估(gu)計(ji)Tm值至(zhi)少幾度到低(di)於(yu)它(ta)10℃。例(li)：壹(yi)對沒有簡(jian)並(bing)的(de)引(yin)物(wu)—模板(ban)的計(ji)算(suan)Tm值為(wei)62℃。則(ze)：從65℃—>50℃（每2cycles降(jiang)退(tui)火溫度1℃），再在50℃退(tui)火溫度下(xia)做15個循(xun)環。實(shi)驗(yan)中如持(chi)續(xu)出(chu)現(xian)假(jia)象帶(dai)（雜(za)帶(dai)），則是(shi)因(yin)為(wei)起(qi)始(shi)退(tui)火溫度太低(di)，或目的(de)擴增(zeng)產(chan)物(wu)和非(fei)目的產(chan)物(wu)的Tm值相差(cha)無幾(ji)，或非(fei)目的擴(kuo)增(zeng)物(wu)以更高的擴增(zeng)效(xiao)率擴(kuo)增(zeng)，可(ke)把退(tui)火溫度每降(jiang)低1℃所(suo)需的(de)循(xun)環數增(zeng)加(jia)到(dao)3或4。